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倒置熒光顯微鏡中,熒光光源裝置是提供一定波長的激發(fā)光使標(biāo)本受激發(fā)射熒光,再通過顯微鏡的物鏡,B鏡系統(tǒng)使熒光圖象放大以供觀察,因此,一般來說,任何顯微鏡都可以用于熒光顯微術(shù)。
濾色系統(tǒng)是熒光顯微鏡的重要部分,它由激發(fā)濾片(第一相片)和抑制濾片(第二濾只)所組成。前者提供一定波長范圍的激發(fā)光,后者提供相應(yīng)波長范圍的熒光。其玻片通常用有色玻璃組成。其型號各國均不相同。
熒光顯微鏡激發(fā)濾片根據(jù)光源和熒光色突的特點(diǎn),可分為露外光激發(fā)濾片,紫氏光激發(fā)濾片和紫外藍(lán)光激發(fā)濾片。熒光顯微鏡所需激發(fā)濾片的厚度,主要根據(jù)所用顯微鏡激發(fā)方式而定,暗場熒光顯微術(shù)要求激發(fā)濾片薄一些,明場時則要求厚一些,因?yàn)槭褂冒祱鰰r激發(fā)光不會按進(jìn)入物鏡,另外還得考慮標(biāo)本情況和目的性,基本原則是以獲得明亮的熒光相更好的背景襯托為準(zhǔn)。
熒光顯微鏡抑制濾片的選擇,主要根據(jù)激發(fā)濾只而定。其原則是以*吸收激發(fā)光為目的,透過任何可見光(*互補(bǔ))以保護(hù)眼睛不受紫外光的刺激和損害。為與激發(fā)濾片相對應(yīng),抑制濾片也可分為:紫外光抑制濾片、紫藍(lán)光抑制濾片和紫外驗(yàn)光抑制濾址。
上面介紹了倒置熒光顯微鏡的濾色系統(tǒng)后,再來了解下倒置熒光顯微鏡的照明選擇根據(jù)什么來考慮。
熒光顯微鏡的照明可根據(jù)聚光器的構(gòu)造和激發(fā)光的波長按以下三點(diǎn)考慮:
①從熒光像的反差要求來看,UV激發(fā)暗場聚光器照明更好。
②以像的亮度來考慮,BV激發(fā)濾光片暗場觀察效率更高。
③UV激發(fā)濾光片暗場觀察和BV激發(fā)暗場聚光器照明的特性,可看作介于這兩種照明方法之間,但前者濾光片暗場的性質(zhì)較強(qiáng),顯示圖像較明亮,反差小;后者因保留暗場光路的性質(zhì),故顯示圖像較暗,而反差有所改善。當(dāng)實(shí)際使用熒光顯微鏡時,應(yīng)采用更適合標(biāo)本要求的照明法進(jìn)行觀察。