熒光顯微鏡用于研究化學(xué)物質(zhì)在細(xì)胞中的吸收、運(yùn)輸、分布和定位。被測(cè)物體產(chǎn)生熒光的方式有兩種:自發(fā)熒光,紫外線照射后直接發(fā)出熒光稱為二次熒光,被觀察物經(jīng)熒光染料處理后,經(jīng)紫外光照射后才能發(fā)出熒光。細(xì)胞中的一些物質(zhì),如葉綠素,受到紫外線照射后會(huì)產(chǎn)生自發(fā)熒光。其他物質(zhì)雖然本身沒有熒光,但用熒光染料或熒光抗體染色后,可以發(fā)出二次熒光。
熒光顯微鏡采用發(fā)光效率高的點(diǎn)光源,發(fā)射一定波長(zhǎng)的光(紫外光365nm或紫藍(lán)光420nm)作為激發(fā)光,激發(fā)標(biāo)本中的熒光物質(zhì)發(fā)出各種顏色的熒光,然后通過物鏡和目鏡的放大進(jìn)行觀察。在這樣強(qiáng)的對(duì)比背景下,即使熒光微弱,也容易識(shí)別,靈敏度高,主要用于研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)功能和化學(xué)成分。
熒光顯微鏡可分為兩種類型:透射顯微鏡和下落顯微鏡。前者是原始的,后者是的。兩種熒光顯微鏡的基本構(gòu)造相似,主要區(qū)別如下:透射激發(fā)光通過標(biāo)本,整個(gè)標(biāo)本產(chǎn)生熒光,然后進(jìn)入物鏡,放大倍數(shù)越高,熒光越弱;入射的激發(fā)光投射到樣品表面,樣品表面產(chǎn)生熒光,然后熒光進(jìn)入物鏡。放大倍數(shù)越高,熒光越強(qiáng),適合高倍觀察。
熒光顯微鏡的主要部件有汞燈光源、激發(fā)濾板、分色鏡(脫落式)、壓制濾板、暗場(chǎng)聚光器(透射式)等。此外,由于汞燈發(fā)熱嚴(yán)重,大部分都裝有吸熱過濾器。有些熒光顯微鏡也有相位差物鏡和環(huán)形光闌,所以可以進(jìn)行相位差觀察。而熒光顯微鏡采用倒置框架,還有倒置顯微鏡等等。
此外,上述所有顯微鏡都可以通過安裝CCD組裝成數(shù)字顯微鏡,將顯微鏡看到的物理圖像轉(zhuǎn)換成數(shù)模圖像,并使其在計(jì)算機(jī)上成像。因此,我們可以從傳統(tǒng)的普通雙目觀察到顯示器上的再現(xiàn)來研究微觀領(lǐng)域,從而提高工作效率。
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